組織經一系列的處理后，就必須進行固定，當然有的組織是先固定，再進行處理，然后再固定。固定的作用，從組織學的角度其簡單的定義是，保持細胞、組織的固有形態和結構，使之盡量保持細胞、組織的固有形態和結構，而從免疫組化技術的角度，固定的作用不僅是使細胞內蛋白質凝固，盡量減少或終止外源性酶和內源性酶的反應；防止細胞的自溶，以免使抗原擴散至組織間質；以保持組織的固有形態和結構；更重要的是保持組織或細胞的抗原性，不但要使抗原不導致失活，而且不使抗原發生彌散的現象，才能在免疫組化染色時，不產生過深的背景，影響對陽性物的判斷。

組織細胞固定液的使用說明：
1、對于細胞樣品，去除培養液后，按照每六孔板一個孔加入1毫升固定液的比例，加入 4%多聚甲醛固定液。對于細胞涂片等其它細胞樣品，加入固定液的量以充分蓋住樣品為準。通常室溫固定10-20分鐘即可，但固定較長時間，例如1-2小時也是可以的。后續需使用適當的洗滌液充分洗滌以去除殘留的多聚甲醛。
2、對組織切片，加入4%多聚甲醛固定液量以充分覆蓋切片為準，或使用染色架進行固定。通常室溫固定10-20分鐘即可完成固定，但切片較厚時可以固定較長時間，例如1-2 小時。后續需使用適當的洗滌液充分洗滌以去除殘留的多聚甲醛。
3、對于組織塊樣品，浸泡入4%多聚甲醛固定液中，室溫或4℃浸泡固定2-24小時。建議不超過8小時，除非組織塊特別大，難以滲透。固定完成后，放入裝有蒸餾水的離心管中清洗，每15-30分鐘換一次，共6-8次，建議在搖床進行，或用流水沖洗1-2小時。隨后梯度脫水，進行包埋。如果暫時不包埋可放入70-75%的酒精中保存。